固相萃取工作原理是利用選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理。較常用的方法是使液體樣品溶液通過吸附劑相互融合，保留其中被測物質(zhì)進展情況，再選用適當(dāng)強度溶劑沖去雜質(zhì)應用情況，然后用少量溶劑迅速洗脫被測物質(zhì)不斷豐富，從而達到快速分離凈化與濃縮的目的深刻內涵。固相萃取也可以將其近似地看作一種簡單的色譜分離過程著力增加。下面以上海本昂科學(xué)儀器有限公司的SPE-12固相萃取儀為例體系，簡單介紹固相萃取儀的操作方法及步驟。

一背景下、選擇SPE小柱或濾膜
首先多種場景，根據(jù)待測樣品的性質(zhì)，選擇對其有較強保留能力的固定相開展試點，若待測樣品帶負(fù)電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽離子交換填料集中展示。若為中性待測物, 可用反相填料萃取。SPE小柱或濾膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測物的濃度大小而定規劃。對于濃度較低的體內(nèi)樣品, 一般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品建設。

二共同、活化
萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml溶劑沖洗濾膜使SPE填料保持濕潤, 因為填料干燥會降低樣品保留值，而各小柱的干燥程度不一,也會影響回收率的重現(xiàn)性。先用甲醇等水溶性有機溶劑沖洗填料, 因為甲醇能潤濕吸附劑表面, 并滲透到非極性的硅膠鍵合相中, 使硅膠更容易被水潤濕在此基礎上；然后再加入水或緩沖液沖洗，創(chuàng)造和樣品溶劑相容的環(huán)境并提高回收率探索創新。

三開展、上樣
一般可采取以下四種方法：
(1) 用0.1mol/L 酸或堿調(diào)節(jié), 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃取前來體驗；
(2) 用甲醇強大的功能、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃取充分發揮；
(3) 用酸或無機鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 調(diào)節(jié)pH 值后萃扰c時俱進。?/span>
(4) 超聲15min后加入水解決方案、緩沖液, 取上清液萃取更優質。流速應(yīng)控制為1ml/min, 流速快不利于待測物與固定相結(jié)合。

四初步建立、淋洗
反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機溶劑項目、無機鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個小柱的容積, 而SPE濾膜為5～10ml應用優勢。

五相對較高、洗脫
應(yīng)選用5～10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮干后, 再用流動相重組殘留物后進樣發展需要。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法創新內容。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物信息。若待測物可電離, 可調(diào)節(jié)pH 值, 抑制樣品離子化, 以增強待測物在反相SPE 填料中的保留, 洗脫時調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫, 收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達到*分離效果實踐者。在洗脫過程中應(yīng)減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫, 回收率更高。